Ch2. Vectors for gene Cloning: Plasmids and Bacteriophages

- Plasmids

•       * bacterial chromosome은plasma membrane에 붙어 있음.

•       세균의 세포 내에 복제되어 독자적으로 증식할 수 있는 염색체 외의 DNA분자를 총칭

•       하나 이상의 유전자 carry.

•       세균의 생존엔 필수적이지 않으나 이점을 줄 수 있음.

•       다른 종의 세포 내에도 전달 가능

•       Ex) antibiotic resistance gene. 실험실에서 selectable marker로 이용 가능. ➝ Resistance (R plasmid)

: Vector는tetracycline저항성 유전자를 가지고 있다.

 Plasmid를 가지고 있는 E. coli와 없는E. coli를 선별하려고 한다.

 tetracycline저항성 plasmid가 있는 E. coli만tetracycline이 포함된 medium에서 자랄  것이다.

 

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•       Non-integrative Plasmid

 : 스스로의 DNA replication origin (복제 기점)을 가지고 Host cell  (Bacteria) 안에서 독자적으로 자람.

 

•       Episome

: Plasmid가bacterial chromosome에integration되어, 마치 chromosome처럼 분열함.

: integration되어 있는 상태에서 ㅁ 부분이 episome임.

 

- Copy number

•       염기 서열이 몇 번 반복되는가 = 개수

•        Plasmid size ∝ 1/copy number

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Conjugation and Compatible

•        Horizontal gene transfer. 같은 세대 간의 gene transfer

•        Donor cell과recipient cell이pilus에 의해 접합.

•        A copy of plasmid가recipient cell로 이동.

•        Conjugation과plasmid의 이동은 transfer (tra gene)에 의해 조절됨.                    

Conjugative plasmid에는 있지만  Non-conjugativetype에는 없음. ➝  Fertility (F plasmid)

 

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- The Phage infection cycle

- lytic cycle, 용균 주기. T4파지

•        phage가 세균에 감염한 뒤, 세균을 파괴하고 자손을 방출.

•        기본적으로 모든 bacteriophage들은 lytic cycle을 함.

 

1. phage 가 세균 표면에 부탁. 세포벽을 분해하고 DNA를 세포질 내로 주입. 이때 capsid단백질은 들어가지 않음.

2. 전기) phage DNA molecule가 복제됨.

3. 후기) phage 의 capsid단백질이 합성됨. DNA와capsid단백질이 조립됨.

4. 세포벽을 파괴하고 phage들이 방출됨.

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